T4 RNA连接酶催化RNA的5个磷酸和3个羟基之间形成磷酸二酯键。它最活跃的是密封缺口的双链RNA，但它也会加入单链RNA的末端，可以连接RNA的3个羟基与DNA的5个磷酸形成双链形式。酶需要ATP，除非底物的5端已预先腺苷化。
T4 RNA ligase catalyses the formation of a phosphodiester bond between a 5′ phosphate and 3′ hydroxyl of RNA. It is most active in sealing nicked double-stranded RNA but it will also join the ends of single-stranded RNA and can ligate the 3′ hydroxyl of RNA to the 5´ phosphate of DNA in a double stranded form. The enzyme requires ATP unless the 5’ end of the substrate is preadenylated.
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